产品货号：
JN5078
中文名称：
Cas13a核酸酶
英文名称：
LwaCas13a Nuclease
产品规格：
200pmol|1nmol
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品源自Leptotrichia wadei(Lwa)细菌，采用大肠杆菌重组表达，纯度超过95%，既可以用于体外RNA切割，体外RNA检测，也可用于活细胞RNA的调控、RNA基因编辑，同时也可以用于光学探针生物学标记。Cas13a在体外与crRNA稳定结合，将Cas13a/crRNA（或者crRNA质粒）转入细胞，实现细胞内RNA的编辑，Cas13a/crRNA也可以被靶RNA激活，从而实现体外高灵敏度的RNA检测。
Cas13a核酸酶（又名C2c2）是VI型CRISPR-Cas系统效应蛋白，具有RNA介导的RNA内切酶活性。在靶标单链RNA存在PFS序列的情况下，可特异性地切割靶标RNA。此外，Cas13a还具有依赖于靶标单链RNA的反式切割活性（即旁路切割活性），可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒。
| 组分 | 200pmol | 1nmol |
| Cas13a Nuclease(5pmol/μL) | 40μL | 200μL |
| 10×Cas13a Reaction Buffer | 1mL | 1mL×5 |
保存：-70℃
500mM NaCl，20mM NaAc，0.1mM EDTA，1mM TCEP，50% (v/v) Glycerol，pH6.0@25℃。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达95%；内毒素含量<100EU/mg；qPCR方法检测无大肠杆菌基因组残留；无RNase、核酸内、外切酶污染。
- 蛋白分子量为140kDa
140ng/μL = 1pmol/μL - crRNA设计：
可以根据如下说明设计Cas13a Nuclease的crRNA。其序列为
5’-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAAC NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN-3’
其中，5’-Direct Repeat region (长度36nt，直接重复区，红色字体) + Spacer region(长度25～35nt，靶标结合区，灰色区域)-3’。
注：Cas13a切割靶标ssRNA需要特定5’-A/U/C-3’的PFS（protospacer flanking sequence）。
- 建议全程在冰上配制体系。
- 为了保证反应的正常进行，需使用高质量的RNA模板。
- 使用RNase Free的耗材（离心管、枪头等）。
切割反应：
- 在冰水浴上混合以下体系：
成分 用量 10×Cas13a Reaction Buffer 2μL 靶标ssRNA (500nM) 1μL crRNA (500nM) 2～8μL ssRNA reporter (FAM-BHQ1) (10μM) 0.5μL Cas13a Nuclease 1-6pmol RNase-Free Water 至20μL - 37℃每30-60s收集一次荧光，80-99cycles。
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